淋巴細(xì)胞分離液使用過程問題解答
問題1.淋巴細(xì)胞分離液的溫度對于分離的影響有多大,有無做過不同室溫溫度及不同液體溫度下的分離效果驗證?
淋巴細(xì)胞分離液由于配制時的環(huán)境溫度即為20℃±2℃,保證該溫度下分離液密度為1.077±0.001g/mL,分離液的作用原理:密度梯度分離,分離成功的關(guān)鍵即為正確的密度保證。溫度和密度緊密,高溫度下,分離液低密度;低溫度下,分離液高密度,因此建議使用時,樣品和分離液的溫度均應(yīng)為18℃-22℃之間。
建議: 使用時,環(huán)境、樣品及分離液的溫度控制均應(yīng)在20℃±2℃
問題2.如何更好的提高血液分離效率,那些因素會導(dǎo)致提取效率過低?
影響因素:
ü樣本新鮮程度:*分離時間為2h以內(nèi)
ü血液稀釋比例
ü所使用離心管直徑高度:分離液和樣本量在管中的高度不得超過管體積的2/3
ü分離液與樣本的比例:分離液至少得和上樣樣本體積一致,分離液越多越好
ü血液個體差異問題
ü血液及分離液都不要經(jīng)過冷藏及冷凍,且使用時的溫度在18℃-22℃之間
離心力及離心時間
問題3.每個客戶的離心機(jī)不同,是否可以使用統(tǒng)一的離心力提取細(xì)胞?如果使用統(tǒng)一的離心力提取淋巴細(xì)胞效果如何?
因為血液個體差異粘稠度、采血時間、血液量等,根據(jù)不同的因素來進(jìn)行調(diào)整??梢越y(tǒng)一離心力,但需根據(jù)個體差異略有改動。
問題4.有一些的離心機(jī)有升速降速速率調(diào)節(jié),如何來設(shè)定升速降速速率以保證能得到數(shù)量及純度較高的PBMC(舉例)?有一些普通的離心機(jī)沒有升降速速率調(diào)節(jié),PBMC層就就形成得不好,如何解決此類問題?
建議升速為1min,降速為3min分離效果理想。升降速時間不包含在離心時間里。
問題5.說明書上是針對骨髓、臍帶血、外周血標(biāo)本,我們在使用過程中還會遇到胸腹水、心包積液等體液標(biāo)本,那對這類標(biāo)本的分離沒有特殊分離要求?
除血液樣本以外,其他來源樣本首先要富集樣本中的細(xì)胞,要求細(xì)胞懸液濃度控制在2×108-1×109個/ml,效果*。
問題6.有一些標(biāo)本本身淋巴細(xì)胞百分比就比較低,如何盡可能的提高得率或是有無方法去除掉一些其他不要的細(xì)胞?
要選擇合適的試管、樣本要2h以內(nèi)進(jìn)行分離,分離液使用量要多余樣本量,以及離心力、離心時間、溫度要合適等。